【摘 要】簡(jiǎn)單描述了醫(yī)院 PCR 實(shí)驗(yàn)室的平面布局及工藝流程；總結(jié)了各規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)與實(shí)際使用的需求，提供了PCR實(shí)驗(yàn)室各功能房間的空調(diào)通風(fēng)室內(nèi)設(shè)計(jì)參數(shù)；并對(duì)各區(qū)域的空調(diào)、通風(fēng)設(shè)計(jì)進(jìn)行了詳細(xì)的介紹。

PCR 技術(shù)自 1985 年問(wèn)世以來(lái)，憑其靈敏度高、特異性強(qiáng)、方便快捷、對(duì)樣品要求低等優(yōu)點(diǎn)，可測(cè)出普通檢驗(yàn)難以檢測(cè)出的病毒，已廣泛應(yīng)用于醫(yī)院的臨床診斷和各防疫檢測(cè)部門(mén)的疫病診斷。但是，這種實(shí)驗(yàn)需要有能保證絕對(duì)安全、配置合理的實(shí)驗(yàn)室和非常規(guī)范的操作為前提。近年來(lái)對(duì)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的建設(shè)越來(lái)越得到重視，因其對(duì)檢測(cè)結(jié)果的可靠性、準(zhǔn)確性和安全性起到至關(guān)重要的作用。

建設(shè) PCR 實(shí)驗(yàn)室首先要有規(guī)范的管理和內(nèi)部質(zhì)量控制流程，其次是分析各醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室處理的主要疾病對(duì)象，根據(jù)病原的生物危害程度、每天實(shí)驗(yàn)的數(shù)量等，設(shè)置相應(yīng)的通風(fēng)空調(diào)系統(tǒng)。其中要著重考慮實(shí)驗(yàn)中交叉污染的控制、室內(nèi)人員的職業(yè)保護(hù)和排出物對(duì)室外環(huán)境的無(wú)害化處理。

本文探討了公立醫(yī)院在有限的資源下，采取經(jīng)濟(jì)合理的方式，建設(shè)符合國(guó)家相關(guān)規(guī)范要求，又具有一定前瞻性，對(duì)室內(nèi)的醫(yī)務(wù)人員有所保護(hù)，又不對(duì)室外環(huán)境造成污染的 PCR實(shí)驗(yàn)室。供讀者參考。

PCR (Polymerase Chain Reaction) 即聚合酶鏈?zhǔn)椒?/span>應(yīng)，又稱無(wú)細(xì)胞分子克隆系統(tǒng)或體外酶促基因擴(kuò)增法。其基本原理類似于 DNA 的天然復(fù)制過(guò)程，是在模板 DNA、引物和 4種脫氧核苷酸存在的條件下，依賴于 DNA 聚合酶的酶促合反應(yīng)，將待擴(kuò)增的DNA片段與其兩側(cè)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈引物經(jīng)“高溫變性——低溫退火——引物延伸”三步反應(yīng)的多次循環(huán)，使 DNA 片段在數(shù)量上呈指數(shù)增加，該技術(shù)可以將極微量的靶DNA 特異地?cái)U(kuò)增上百萬(wàn)倍，從而在短時(shí)間內(nèi)獲得所需的大量特定基因片段，因此能在臨床上檢測(cè)單分子 DNA或每 10 萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中僅含 1 個(gè)靶 DNA 分子的樣品。

根據(jù)《臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室基本設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定，臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室需要設(shè)置試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)等四個(gè)區(qū)域。如使用全自動(dòng)分析儀，區(qū)域設(shè)置可以適當(dāng)合并。

雖然 PCR 實(shí)驗(yàn)室的四個(gè)功能分區(qū)是固定的，但各醫(yī)院在實(shí)際布置中卻千差萬(wàn)別，其主要布置形式有分散式和集中式兩種。

分散式：各實(shí)驗(yàn)用房彼此相距較遠(yuǎn)，呈分散布置形式。各實(shí)驗(yàn)之間不易相互干擾。

集中式：完成 PCR 四個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程的實(shí)驗(yàn)用房相鄰布置，形成集中、獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)區(qū)域。每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)設(shè)置獨(dú)立緩沖間、實(shí)驗(yàn)室間應(yīng)設(shè)置帶消毒裝置的傳遞窗。

在理想情況下，PCR 實(shí)驗(yàn)室緩沖間內(nèi)，可設(shè)置正壓，使室內(nèi)空氣不流向室外，室外空氣不流向室內(nèi)。若房間進(jìn)深允許，可設(shè) PCR 內(nèi)部專用走廊。在減少室內(nèi)外空氣交換方面，緩沖間比專用走廊更有意義。試劑和標(biāo)本通過(guò)機(jī)械連鎖傳遞窗傳遞，保證試劑和標(biāo)本在傳遞過(guò)程中不受污染，達(dá)到人、物分流。

1. 試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)

該實(shí)驗(yàn)區(qū)主要進(jìn)行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑和用于標(biāo)本制作的材料應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū)，不得經(jīng)過(guò)其他區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi)，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。

2. 標(biāo)本制備區(qū)

該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為臨床標(biāo)本的保存、核酸 (RNA、DNA) 提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測(cè)定RNA時(shí)cDNA 的合成。

本區(qū)的壓力梯度要求為：相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)檎龎?，以?/span>免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。另外，由于在加樣操作中可能會(huì)發(fā)生氣溶膠所致的污染，所以應(yīng)避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動(dòng)。

對(duì)具有潛在傳染危險(xiǎn)性的材料，必須在生物安全柜內(nèi)開(kāi)蓋，并有明確的樣本處理和滅活程序。 

3. 擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū) 

該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為DNA或cDNA 擴(kuò)增。此外，已制備的 DNA 模板和合成的 cDNA( 來(lái)自樣本制備區(qū) ) 的加入和主反應(yīng)混合液 ( 來(lái)自試劑貯存和制備區(qū) ) 制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。在巢式 PCR 測(cè)定中，通常在第一輪擴(kuò)增后必須打開(kāi)反應(yīng)管，因此巢式擴(kuò)增有較高的污染危險(xiǎn)性，第二次加樣必須在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。

手術(shù)室凈化系統(tǒng)。 

        本文部分摘自公眾號(hào)（愛(ài)德凈化供氧）。